前不久，我们介绍了点击化学在新药研发中的应用（点击查看详细）。作为2022年诺贝尔化学奖得主KBarrySharpless的非诺奖著研究成果，点击化学的头想必大伙都听过。今天要为大家介绍的这篇JACS文章则反其道而行之，标题“AChemoselectiveRapidAzo-CouplingReaction(CRACR)forUnclickableBioconjugation”之中的“非点生物偶联”的确引人瞩目。点击化学用于生物偶联已经是当今化学生物学界的经典操作，这篇文章的“非点生物偶联”又是怎么回事呢咱们就来看看到底是怎样的速反应用于完成“非点生物偶联”。脚踏实地的对试剂厂家进行深入研究是追求发展的唯一办法。亚索试剂作为一家提供高端研发用试剂的厂家，常备库存万瓶，涵盖通用试剂，分析试剂,有机试剂,无机试剂，生物试剂等，作为知名的化学试剂厂家，欢迎广大客户洽谈选购。https://www.yasuoshiji.com

这篇文章出自美国波士顿学院AbhishekChatterjee（点击查看介绍）研究团队，报道的核心技术就是芳基重氮化合物和5-羟基色氨酸（5HTP）具有化学选择性的速反应。下面这个图很好的说明了选择性和速反应两个特点。重氮化合物4NDz和5HTP的反应速率常数可达63,000M-1s-1，远高于同酪氨酸的反应速率常数。

恐怕有的同学会不服气了，报道个选择性高效反应有什么好稀奇的凭啥就能发JACS嗯，这就要看发现的反应用在哪里啦。俗话说的好，“学会文武艺，货与帝王家”（咳……咳……有点串场，比较近单田芳先生的评书听的多了点）。

AbhishekChatterjee教授。图片来源：BostonCollege

Chatterjee等人报道的反应比较大用处就是标记蛋白。化学反应搭上生物应用的车，学科交叉瞬间“高大上”。谁不知道21世纪是生命科学的世纪啊……（泪流满面ing……）

要说这反应的应用也简单明了。一言以蔽之，作者要证明含有5HTP的蛋白可以被重氮化合物标记到，不含5HTP的蛋白不能被标记。

其证明过程也很巧妙，作者制备出来含有5HTP的绿色荧光蛋白（sfGFP--5HTP）和不含5HTP的绿色荧光蛋白（wild-type-sfGFP），分别同化合物4CDz孵育，再用生物质谱测定蛋白分子量。很明显，sfGFP--5HTP的分子量发生了增加，wild-type-sfGFP的分子量明显变化。另外，作者分别利用含荧光基团的重氮化合物7、含生物素的重氮化合物8同上述两种蛋白进行孵育，随后只能在sfGFP--5HTP检测到特征的荧光信号和生物素信号。

除了GFP这个生物学研究常用的工具蛋白外，作者把这个技术还应用到了抗体药物Herceptin。作者在Herceptin的Fab片段上引入了5HTP，随后利用前述化学反应进行标记。检测思路同上面类似，咱们就不再赘述了。

记性好的同学该问了，讲了反应，讲了应用，开头说的“非点”呢嗯，是时候该放大招了。为什么叫“unclickable”经典的点击化学成键后非常稳定，通常难以断键。这篇文章的作者报道的这个反应，不但反应，选择性好，产物还可分解！生成的偶氮化合物在连二亚硫酸盐的作用下可以分解，并且被标记的蛋白也能发生这种分解反应。要知道，能“上”能“下”的标记物应用空间异常广阔啊。大写加粗的服气！

同往常一样，本君比较后浅谈两句自己对这文章的看法吧。这文章读了多遍，真心觉得耐人寻味、妙不可言。首，精妙，反应高效高选择性，还找到了一个火热的应用领域；第二，巧妙，简单的验就证明了标记蛋白的应用前景；第，绝妙，标记之后的产物居然还可以分解，标记能上能下。要说不足也是有的，毕竟5HTP不是构成蛋白质的基本氨基酸，这也使得这种标记蛋白的方法受到很大局限，只能人为在要研究的蛋白中先引入5HTP再应用标记策略。如果能在常见氨基酸中现这类反应，恐怕要引领新的化学生物学研究方法了。